在最新的研究中，第三军医大学西南医院的唐康来、郭林、陈玉佳与第三军医大学的缪洪明、纽约大学的刘传聚共同在《Signal Transduction and Targeted Therapy》（IF：408）上发表了题为《Malate initiates a proton-sensing pathway essential for pH regulation of inflammation》的论文。他们的研究结果显示，TCA循环中间体L-苹果酸可以直接结合免疫球蛋白BiP，抑制BiP与干扰素调节因子2结合蛋白2（IRF2BP2）的相互作用，进而保护IRF2BP2不受BiP驱动的降解，同时在体外和体内显著抑制炎症反应。
研究表明，pH值的降低促进L-苹果酸羧基的质子化，从而增强了L-苹果酸与BiP的结合，并以羧基依赖的方式抑制BiP与IRF2BP2的相互作用。在巨噬细胞中，BiP-IRF2BP2信号通路对pH值变化非常敏感，这一通路可以调节抗酸化炎症以及细胞内pH碱化剂引起的促炎作用。此外，研究还发现，鼠结肠中的局部碱化能够以骨髓BiP依赖的方式诱导结肠炎，并降低IRF2BP2的蛋白质水平。
在这一研究中，作者使用汉恒生物提供的HBLV-U6-gRNA-EF1-CAS9-PURO慢病毒载体，构建了Hspa5+/-和Mdh2-/-细胞系，通过敲除Raw2647细胞中的Hspa5和Mdh2基因展开实验。
初步研究通过脂多糖（LPS）刺激的骨髓衍生巨噬细胞（BMDM）模型筛选了38种可溶性能量代谢中间体，最终发现L-苹果酸对炎症因子Il1b、Tnf和Il6表现出了最显著的抑制作用。ELISA实验进一步验证了L-苹果酸显著抑制IL-6和TNF-α的水平，并通过Western blot证实其可以抑制IL-1β前体的表达。研究者通过调整Raw2647细胞系的Mdh2基因，观察到Mdh2的缺失增加了细胞内的苹果酸水平，进而减弱了LPS诱导的促炎细胞因子的表达。
在体内实验中，给予小鼠200或400 mg/kg的L-苹果酸显著提高了LPS急性炎症模型中的存活率，并减轻了胶原抗体诱导的关节炎模型小鼠的爪肿胀、关节破坏和临床评分。这一系列结果显示出L-苹果酸在炎症管理方面的潜在应用。
研究显示，L-苹果酸可以独立于代谢途径，直接与BiP结合，从而实现抗炎效果。在DARTS实验中，经过蛋白酶消化的Raw2647细胞显示出L-苹果酸处理后保护的蛋白中BiP显著富集。通过表面等离子共振（SPR）检测，研究发现L-苹果酸可直接作用于重组BiP蛋白及细胞内源性全长BiP。在激活的BMDM中，BiP缺失导致LPS刺激后pro-IL-1β的显著下调，并阻断了直接添加L-苹果酸对IL-1b水平的抑制作用。
在探索BiP与相关配体结合的过程中，研究发现L-苹果酸能够影响BiP与IRF2BP2之间的结合。实验结果显示，L-苹果酸处理后，RNA-seq分析结果一系列上游转录因子参与了信号通路的转录调控，IRF2BP2在其中扮演了重要角色。研究最终确认，L-苹果酸通过阻断BiP-IRF2BP2的相互作用，进而影响炎症反应。通过共免疫沉淀与免疫荧光技术，研究证明L-苹果酸处理可抑制LPS诱导的BiP-IRF2BP2相互作用。
后续研究进一步探讨了IRF2BP2是否介导了L-苹果酸-BiP轴对炎症反应的影响。结果显示，L-苹果酸能够促使BiP依赖性增加IRF2BP2蛋白水平而不影响其mRNA水平。同时，BiP诱导剂可显著降低LPS刺激后的IRF2BP2蛋白丰度，显示出BiP对IRF2BP2的调控作用。L-苹果酸的作用在体内实验中也成功阻断了BiP-IRF2BP2的相互作用，从而保护IRF2BP2免受降解。
研究还发现，pH值的变化对BiP-IRF2BP2信号传导有显著影响。通过不同的pH调节剂，作者观察到pH值的下降确实会抑制BiP-IRF2BP2的相互作用。这一发现强调了BiP-IRF2BP2信号通路在细胞内pH平衡及炎症反应中的重要作用。
该研究揭示了L-苹果酸作为细胞内pH感应分子的潜力，并通过BiP-IRF2BP2信号通路调控炎症反应的机制。这一新的生物机制为理解代谢与免疫系统的交互提供了新的视角，且可能为通过调控细胞内pH值或靶向BiP-IRF2BP2信号通路来控制炎症介质表达提供新的治疗策略，对治疗炎症相关疾病有着重要的意义。因此，在未来的研究和临床应用中，**尊龙凯时**将继续致力于探索这一领域的重要进展。