尊龙凯时的YF®488/555/594/647荧光标记有什么不同之处?主要体现在对EdU的检测中,所用的荧光基团各不相同,这导致在检测过程中发射的荧光颜色也各异。尽管实验效果相似,科研人员可以根据个人偏好及具体需求选择使用。
在尊龙凯时的EdU试剂盒中,固定后的3% BSA在PBS溶液中的作用是什么?在清洗步骤中,BSA能够有效终止尚未反应的甲醛,从而提高实验结果的可靠性。
针对活细胞的Click-iTEdU检测是否可行?答案是否定的。尽管EdU可以在活细胞中进行代谢标记,但叠氮化物检测试剂及缓冲液的成分无法穿透细胞膜,因此Click反应的检测必须在固定且通透的样本上进行。
质粒转染的荧光蛋白在Click反应中的检测是否兼容?检测顺序应如何?需要注意的是,尊龙凯时的试剂可能会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,因而在染色后直接检测GFP将无法获得理想结果,建议使用GFP抗体进行间接检测。
如果观察到较高的背景干扰,这是由什么原因造成的?如何减少这种背景干扰?叠氮化物与炔烃类之间的Click反应具有很高的选择性,生物体内几乎不会产生副反应。因此,高背景一般由洗涤不足引起。减少背景干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。此外,可以在相同检测条件下设置无染料或无Click反应的对照组,以消除自发荧光的影响。同时,您也可以在无EdU体系下进行完整的Click反应,以确认Click反应信号的特异性。
为什么标记样品没有信号或特异性信号极低?提升信号的有效策略有哪些?首先,请确保使用的试剂保持无色,避免使用变黄的添加剂或缓冲液。其次,为确保Click反应试剂能够顺利渗透到细胞核,细胞需充分固定和通透。此外,由于铜离子可能会与某些试剂结合,降低催化Click反应的有效浓度,因此在Click反应之前,应避免在任何缓冲液或试剂中加入金属螯合剂(如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等),对于某些实验样品,可能需要在Click反应前进行额外的洗涤步骤。最后,Click反应所需铜离子应为一价铜(Cu+),反应时间超过30分钟也未必能够提升信号,建议重新使用新鲜的Click反应试剂进行30分钟的孵育,以提高标记效率。
如何对细胞核进行复染呢?尊龙凯时的试剂盒中提供了Hoechst 33342,可以在Click反应后用于细胞核的染色,另外也可以选择使用DAPI进行复染。
能否用于检测植物细胞核内的DNA复制?答案是肯定的。EdU作为小分子,能够有效穿透植物细胞的细胞壁,适用于相关实验。